1. Ọ bụrụ na enwetara m tube nke mkpụrụ ndụ oyi kpọnwụrụ, enwere m ike itinye ya ozugbo na nitrogen mmiri mmiri maka nchekwa?
N'ọtụtụ ọnọdụ, mkpụrụ ndụ ndị a na-ebuga na ice kpọrọ nkụ (-80 Celsius) nwere ike ịlaghachi azụ na nitrogen mmiri mmiri wee gbazee ngwa ngwa ma emesịa.Agbanyeghị, enwere ike ibelata ikike mkpụrụ ndụ mgbe ọgwụgwọ dị otú ahụ gasịrị.Maka ụfọdụ ahịrị cell nwere mmetụta, nke a nwere ike ime ka mgbake cell sie ike karị.A na-eche na ihe omume a bụ n'ihi mgbanwe na nhazi nke kristal ice n'ime sel n'ihi mgbanwe okpomọkụ.Ya mere, a na-atụ aro na a ga-agbaze ma mepụta mkpụrụ ndụ ozugbo enwere ike mgbe ọ nwetasịrị ya.Belata oge nchekwa na -80 Celsius.A na-eji okpomọkụ a naanị maka mbugharị.
2. Kedu ihe nchebe kwesịrị ịme mgbe ị na-ewepụ mkpụrụ ndụ sitere na nitrogen mmiri mmiri maka mgbake?
Cell cryotubes na mmiri mmiri nitrogen nke na-adịghị emechi kpamkpam ma nwee mmiri mmiri nitrogen na-abanye n'ime ha nwere ike ime ka mgbawa ma ọ bụrụ na okpomọkụ nke cryotube na-ebili nke ọma mgbe ọ na-agbaze.Ya mere, a na-atụ aro ka a na-eyi enyo na gloves nchebe mgbe a na-ewepụ mkpụrụ ndụ na nitrogen mmiri mmiri.Maka iweghachite, ọkpọkọ na-ekpo ọkụ kwesịrị ịma jijiji na-aga n'ihu na mmiri ịsa ahụ 37ºC iji mee ka ngwọta na-ekpo ọkụ kpamkpam n'ime nkeji 1-2.Mgbe nke ahụ gasịrị, hichaa n'èzí nke tube na mmanya na-aba n'anya, wee buru ya na tebụl dị ọcha ma nyefee sel na tube centrifuge na 10 ml nke omenala omenala gbakwunyere, centrifuge na 1000 rpm maka 5-10 nkeji, tụfuo ya. nke siri ike, gbakwunye usoro omenala kwesịrị ekwesị wee tinye flask omenala ma tinye n'ime incubator 5% CO2.
3. Gịnị mere e kwesịrị iji chekwaa mkpụrụ ndụ n'ime ikuku ikuku nke tankị nitrogen mmiri karịa na mmiri mmiri?
Selụ echekwara na oge gas nke nitrogen mmiri mmiri nwere ike ịmaliteghachi.Ebe n'oge mmiri mmiri nke nitrogen mmiri mmiri, ọ bụrụ na a naghị emechi tubes lyophilisation nke ọma ma ọ bụ nwee ntapu, kọntaktị kpọmkwem n'etiti sel na nitrogen mmiri mmiri nwere ike imebi ike nke mkpụrụ ndụ mgbe ọ gbazere.
4. Maka mkpụrụ ndụ nkwusioru, kedu ka m ga-esi gbanwee usoro omenala?
Enwere ike ịme mkpụrụ ndụ nkwusioru site n'ịgbakwụnye ọkara ọhụrụ (ọ bụrụ na ohere na-enye ohere) ma ọ bụ site na iji centrifugation kewapụ sel ndị ahụ na nke ochie (100 xg maka nkeji 5) wee mechaa maliteghachi sel ndị ahụ agbagoro na ọkara ọhụrụ.Agbanyeghị, maka ọtụtụ ahịrị cell nkwusioru, ịgbakwụnye ọkara bụ ụzọ ka mma.Kedu ụzọ ọ bụla, ọ dị mkpa ka emegharịa usoro ahụ tupu mkpụrụ ndụ ahụ eruo njupụta saturation kachasị ukwuu.Njupụta nke saturation nke mkpụrụ ndụ dịgasị n'etiti 3 x 10 5 na 2 x 10 6 dabere na ahịrị cell na ọnọdụ omenala (izu ike ma ọ bụ mkpali, ọkwa oxygenation, wdg).A ga-agbanyerịrị mkpụrụ ndụ n'ime mkpụrụ ndụ dị ala ka o wee nwee ike nwetaghachi ihe oriri zuru oke iji mee ka mkpụrụ ndụ na-eto n'ụzọ logarithm.Ọ bụrụ na a na-agbanwe ngwa ngwa na-enweghị ibelata njupụta cell, mkpụrụ ndụ ga-agwụ ngwa ngwa ma nwụọ.Ọ bụrụ na agbazere mkpụrụ ndụ ndị ahụ n'okpuru obere njupụta ha, ha ga-abanye n'oge adịghị ala wee too nke ukwuu ma ọ bụ na-anwụ anwụ.Ahịrị cell nkwusioru ọ bụla nwere njupụta saturation dị iche na oge ngafe, yabụ ọnụ ọgụgụ sel kwa ụbọchị bụ ụzọ isi nyochaa ahịrị sel nkwusioru*.
5. Kedu ọkwa CO2 akwadoro maka omenala cell?
Ọ bụ ezie na ọkwa CO2 na usoro omenala cell sitere na 0.03% ruo 40% (nke dị gburugburu 0.03% CO2 na ikuku), ọ bụ ihe a na-ahụkarị na enweghị CO2 agbakwunyere na ikuku ma ọ bụ ntinye CO2 nke 5% ruo 10%.Ọ dị mkpa iji dozie ntinye nke sodium bicarbonate na ọkara iji mee ka ọkwa CO2 dị na gas gas.Selụ na-emepụta CO2 ma chọọ obere carbonic acid maka uto na nlanarị.Ọ bụrụ na enweghị CO2 agbakwunyere ma mkpụrụ ndụ na-amụba, 4 mM (0.34 g/L) nke sodium bicarbonate anhydrous nwere ike iji.Otú ọ dị, mkpuchi nke flask omenala kwesịrị ikesie ike n'oge a.Ọ bụrụ na usoro omenala chọrọ 5% ma ọ bụ 10% CO2, jiri 23.5 mM (1.97 g / L) ma ọ bụ 47 mM (3.95 g / L) sodium bicarbonate na 37 ° C, n'otu n'otu, na pH mbụ nke ihe dịka 7.6.N'okpuru ọnọdụ ndị a, a ga-ahapụ flask ahụ na-enweghị mkpuchi ma ọ bụ na-eji efere Petri mee ihe iji nọgide na-enwe nha gas.
6. Gịnị mere ụfọdụ mkpụrụ ndụ ji achọ sodium pyruvate?Ego ole sodium pyruvate ka m ga-agbakwunye na ọkara?
Pyruvate bụ organic acid metabolite na ụzọ glycolytic * nke na-abanye ngwa ngwa na-apụ na cell.Ya mere, mgbakwunye nke sodium pyruvate na ọkara na-enye ma isi iyi ike na ikuku carbon maka anabolism, na-enyere aka ịnọgide na-enwe ụfọdụ mkpụrụ ndụ ụfọdụ, na-enyere aka na cell cloning ma ọ bụ dị mkpa mgbe a na-ebelata mkpokọta serum na ọkara.Sodium pyruvate na-enyekwa aka ibelata cytotoxicity nke fluorescence kpatara.A na-agbakwunye sodium pyruvate na njedebe ikpeazụ nke 1 mM.Ngwọta pyruvate sodium pyruvate dị na azụmaahịa na-abụkarị ihe nchekwa nchekwa 100 mM (100X).
Asụgharị ya na www.DeepL.com/Translator (ụdị efu).
Oge nzipu: Jun-21-2022